环状RNA的即使如此，现在与未来

“所有的真理都经历三个阶段。第一，被嘲笑。第二，被激烈反对。第三，被认依此且是足见的。”——Arthur Schopenhauer放射状RNA是近几年来的数据分析热点。近日，美国Brandeis大学海洋台湾大学的Sebastian Kadener等人在EMBO上概述了放射状RNA的数据分析进展。BioArt对其完成了编译，以飨读者。放射状RNA（circular RNA， circRNA）是由偏移依此格（back-splicing）每一次加剧的共价闭故称放射状RNA。其兼具真反应器细十面体之中丰沛，生物上偏向，民间组织抗原暗示，高度保持稳依此，可在神经民间组织之中随衰产出等特征。并且，circRNA可以通过竞争依此格作法与其对应的差分RNA副产物完成卤代烃缓冲。从未有的媒体报道确实它还兼具反式缓冲机能：某些circRNAs能与microRNAs化学键，一些可被中文翻译，缓冲致病反应和行为。本文概述了食肉动物circRNAs迄今为止已知的方法论，总结了circRNAs潜在机能的当前见解，起源的概念，以及本应用或许的下一代朝著。过往到现在断依此：1976年，Sanger首次在类病毒之中断依此了单链共价闭故称放射状的RNA分长子结构设计者。第二份数据分析是1979年Hsu描述了没有自由尾端的放射状RNA的存有。来源不明：零星的数据分析推测circRNAs来由来内源RNA。首篇此类媒体报道是在1991年，偶然断依此白血病遗传物质缺失（DCC）时有发生了非经典依此格作法 (“scrambled exons”) 酪氨酸周期性。随后，又断依此了人类EST-1和Sry遗传物质也有多种完全相同周期性，确实这些兼具scrambled exons的无polyA RNA都是circRNA。并且断依此circSry兼具民间组织抗原，且存有于3个完全相同的血清群落。加剧：在年中的几年里，少量数据分析提出批评了这些分长子结构设计者加剧的或许必要。这包括了假依此：偏移段落对Sry的中时有体是才会的；以及断依此circRNA可以在体外通过反应器提取物加剧。类群：随后的90年代末期到20世纪末期，数据分析断依此多种遗传物质可以加剧circRNAs，并且对推断的circRNAs完成了简单类群为scrambled-exon，反应器苷酸重排副产物（exon-shuffling products），或者只是“非差分mRNA”。此时期的数据分析虽然确实了这些放射状RNA分长子结构设计者的存有，但是对其潜在的影响并未充分认识。爆发式数据分析：大概在2010年开始，RNA-seq电子技术的持续发展以及专供的算出燃气开发，了circRNA 数据分析。在2010年早期，断依此多线粒体食肉动物之中兼具成百上千种circRNA，其之中多数是更是高暗示的，但是有些是高丰度的。而且，在许多前提，如circSry可以是该寄生虫遗传物质（host gene）的主要副产物。2013年的两篇文章除了确实多种哺乳食肉动物之中存有成百上千circRNA以外（野也有盛夏，小杂志开启大炙手可热应用），还推测CDR1as (ciRS-7) 和circSry，只能融故称并缓冲特依此microRNA的已逝性！另外，许多文书工作都确实在人类，鼠，苍蝇之中circRNAs是民间组织和发育时空抗原暗示的。这些数据分析还描述了解剖与不作为circRNAs的从新奇作法。比如，解剖RNase R程序中后的无polyA circRNAs可溶性文库。这个作法只能可溶性circRNAs，也能区分真正的circRNAs和含scrambled exons的mRNAs。由于circRNAs junction的与众完全相同结构上，对其解剖和依此量所需类似设计者的海洋生物化学算出燃气。现而今，从未存有大量的燃气可以注释和二阶circRNAs。或多或少的是从新circRNAs测依此作法和燃气也能测依此潜在的circRNAs内部非对称依此格的存有。民间组织抗原与发育阶段抗原：近几年来，circRNAs的民间组织抗原和所受发育阶段缓冲而加剧的结构上被推测。四部脱离文书工作确实多种circRNAs在之中枢神经该系统之中高丰度存有，并且随着神经分化和发育逐渐降更是高。而且，circRNAs加剧被神经该系统已逝动缓冲，而且在LTP体、小脑、LTP视神经之中大量存有。circRNAs普遍存有于神经民间组织的周期性在衰老食肉动物之中更是明显，所受益了大量的circRNAs，显然了circRNAs水准与线粒体决裂部将呈负都有性。机能与缓冲：假依此，circRNAs可以卤代烃和反式发挥机能。2014年，Ashwal-Fluss断依此circRNAs是与这两项依此格共酪氨酸并且亦然的。因此，circRNAs的海洋生物时有发生加剧了同一寄生虫遗传物质mRNAs小分长子的缩减。几个课题组解剖了反应器苷酸依此格和中时有体所所需之物，推测了中时有体信号相对于在可中时有体反应器苷酸第8军团的外显长子之内。Ashwal-Fluss也显然了缓冲苍蝇之中circMbl副产物的负反馈缓冲环路的存有，在跳蚤之中解剖了第一个参与反应器苷酸中时有体的氨基酸（依此格qmuscleblind， MBL）以及其脊椎食肉动物同源物muscleblind-like氨基酸1（MBNL1）。随后的文书工作解剖了其他的RNA融故称氨基酸RBPs只能在完全相同该系统和海洋生物之中遗传物质暗示反应器苷酸中时有体，包括RNA腺苷脱氨酵素（ADAR），quaking（QKI），FUS，反应器qNF90/NF110，DHX9，表皮依此格缓冲氨基酸ESRP1，丝氨酸/酪氨酸含硫氨基酸。再次，迄今为止的文书工作从未说明了了circRNAs与完全相同该系统时有的都有性。在跳蚤之中枢神经该系统，血清和人类线粒体之中存有只能加剧氨基酸质的一组circRNAs；有的circRNAs与致病声势浩大都有；几份报告推测了circRNAs在血清和跳蚤之中枢神经该系统以及骨髓之中兼具机能；大量数据分析展示了circRNAs和癌症有关。这些持续发展说明了科学界对circRNAs的看法时有发生了模糊的变动，呈现出这个振奋人心和迅速持续发展的应用进入了时代转折点。1. circRNAs的加剧1.1偏移依此格必要反应器苷酸来源不明的circRNAs是通过偏移依此格的特依此类别依此格作法加剧的，即一个5’依此格供体炮轰河口3’依此格反应器糖体，逐步形成3’-5’磷酸二酯键加剧一个放射状的RNA分长子结构设计者。尽管绝大多数真反应器细十面体线粒体之中circRNAs都是由依此格体加剧，完全相同海洋生物之中的就其必要是完全相同。与食肉动物完全相同，植物之中的circRNAs从兼具比较较短的二者之间碱基甚至完全没有朝著性的较短外显长子的第8军团地带而来。寻常的是，古生酵母之中circRNAs的加剧脱离于依此格体，加剧了各种各样的circRNAs，其之中也就是说16%来由来解码遗传物质以及更是少来自于反应器苷酸。多线粒体海洋生物之中，先前媒体报道确实依此格反应器糖体第8军团于可中时有体反应器苷酸是最经典的，而且偏移依此格是通过依此格体拒绝执行。寻常的是，circRNAs普遍构成完整反应器苷酸而且多来由来解码反应器苷酸，都有是相对于于氨基酸解码遗传物质的5’UTR。这加剧了偏移依此格通往由解码碱基到解码碱基（CDS-CDS）和5’UTR-CDS组成，渐趋构成遗传物质的第二个反应器苷酸。这或许与它们的海洋生物时有发生都有，所需相较于平均而言极较短和更是更是高效依此格的外显长子；通常第一个外显长子做到上述两个原则。在许多前提，circRNAs的加剧由来繁复的非对称依此格不得不。一些遗传物质加剧多种非对称依此格异构体以及circRNAs，这显然了偏移依此格和非对称依此格或许是机能都有的。1.2 碱基和氨基酸飞轮反应器苷酸中时有体反应器苷酸来源不明的circRNAs的加剧排斥依赖以下将近一种必要：兼具较短偏移段落或融故称RBPs的外显长子。两种必要都将circRNAs第8军团的外显长子们紧紧挨起来。多种海洋生物之中，可中时有体反应器苷酸被较短外显长子侧腹包围，这些外显长子许多都含有大量的偏移二者之间分组。因此，外显长子之中偏移二者之间段落的存有可以被用来预见反应器苷酸到底有或许时有发生中时有体。完全相同群落之中，偏移二者之间模组兼具完全相同的基序（motif）与丰度，对这些基序完成碱基解剖指示了或许的生物关系。此外，在外显长子之时有和之内的偏移段落模组的地理分布对circRNAs的需求量与类别兼具相当程度影响。尽管第8军团外显长子之中较短偏移段落倡导了反应器苷酸中时有体，这些外显长子之中存有的其他偏移段落或许则会可抑制外显长子时有的化学键（inter-intronic interactions），取而代之的是外显长子内的化学键（intra-intronic interactions）。后者渐趋可抑制反应器苷酸中时有体，或许是通过外显长子时有二级结构设计者竞争。RBPs游离了另一种必要。并非所有第8军团含有较短外显长子的反应器苷酸都能被中时有体。许多可中时有体反应器苷酸第8军团外显长子之中不含有偏移段落，这排斥显然了存有反应器苷酸中时有体的其他必要。MBL与几个高度偏向的外显长子反应器糖体融故称，倡导了其自身遗传物质第二反应器苷酸的中时有体。mbl第二反应器苷酸第8军团的外显长子构成了较短偏移段落，似乎只能保持稳依此外显长子时有化学键，但是在缺乏MBL融故称时或许太弱而不足以倡导反应器苷酸中时有体。这排斥地显然了MBL倡导中时有体是通过融故称到第8军团外显长子从而倡导外显长子-外显长子时有化学键。MBL分长子结构设计者或许时有发生二聚化，把两个反应器苷酸尾端带到一起，从而依此格逐步形成circRNA。其他RBPs，如QKI，FUS，ESRP1也能缓冲反应器苷酸中时有体。再次，跳蚤之中laccase-2遗传物质来源不明的circRNAs的海洋生物时有发生所受到完全相同RBPs的共同缓冲，如异质反应器糖反应器氨基酸hnRNPs以及SR氨基酸，显然了给依此反应器苷酸的中时有体可靠性或许是多种信号的整故称结果。这种通过外显长子-外显长子化学键倡导中时有体时有发生将近部分由来差分依此格的空时有位阻（steric inhibition）。那么，倡导或分心RNA结构设计者的状况，或许变动circRNAs海洋生物小分长子。其实，从未有文书工作确实通过dsRNA特异腺苷脱氨酵素ADAR编辑RNA，缓冲了circRNAs的小分长子。而且，RNA解旋酵素DHX9通过分心基于ALU偏移段落的二级结构设计者限制了circRNAs加剧。DHX9与抗病毒游离的ADAR异构体（p150）如此一来化学键，逐步形成的复故称体分心了RNA二级结构设计者，包括许多只能倡导反应器苷酸中时有体的结构设计者。下调DHX9大大的了circRNAs。这似乎是一个校正必要来缩减circRNAs的国际上加剧，显然了某些circRNAs不只是“加工局限性”或依此格噪音。部分牵涉到dsRNA结构设计者出现的病理情形也或许变动circRNAs小分长子。比如，致病声势浩大qNF90和NF110则会缓冲circRNAs加剧。寻常的是，这些氨基酸与酪氨酸每一次逐步形成的dsRNA结构设计者时有发有机体学键。NF90/NF110像是能保持稳依此这种趋近多糖RNA分长子结构设计者，倡导了一组circRNAs的偏移依此格。寻常的是，NF90融故称反应器糖体是功能性丰沛于第8军团外显长子的ALU motif。因此，这些反应器苷酸的中时有体也可所受到ADAR和/或DHX9遗传物质暗示。1.3 circRNAs小分长子的遗传物质暗示circRNAs由RNA一氧化氮II酪氨酸并且由依此格体加剧。不可忽视的是，许多逐步形成circRNAs的反应器苷酸没有非对称依此格，因此，一些高丰度的circRNAs只能卤代烃缓冲mRNA的加剧。除此之外，circRNAs的加剧不止与依此格有关，还与更是高效的裂解和polyA化都有。如果circRNAs的加剧是与经典依此格竞争，那么变动依此格可靠性或许则会缓冲circRNAs的加剧。通过缓冲卤代烃依此格q或变动RNA 一氧化氮II酪氨酸动力学（被认为可以遗传物质暗示非对称依此格）可以变动依此格可靠性。结果其实如此，下调普遍依此格缓冲长子如SR氨基酸SF2或反应器心依此格体模组（小反应器糖反应器氨基酸粒状U1亚单位70K和C）snRNP-U1-70K，snRNP-U1-C，preRNA加工8（Prp8，Slu7），线粒体决裂周期素40（CDC40），将副产物从差分变成了circRNAs。或多或少，可抑制酪氨酸终止降更是高了circRNAs小分长子。1.4 circRNAs的过氧化物circRNAs没有自由尾端因此并不能通用诸多经典RNA过氧化物唯一可。体外数据分析确实，大多数circRNAs都兼具极较短的半衰期（18.8-23.7h），而其差分对应物是（4.0-7.4h）。circRNAs在体内或许兼具极较短的半衰期，尤其是不决裂线粒体，比如，之中枢神经该系统之中随年龄组降更是高的circRNAs所受益或许是由来这些分长子结构设计者的耐久性与不决裂结构上。与之相反，在高速增殖的线粒体之中circRNAs像是则会所受益，或许由来决裂快于加剧加剧的稀释主导作用。假依此，circRNAs过氧化物或许起始于一个大分长子内切酵素，随后联故称外切和内切。小RNA游离的circRNAs过氧化物是已确依此解剖不错的circRNAs过氧化物唯一可。然而，唯一的例长子是CDR1as被miR-671过氧化物。CDR1as的需求量被miR-671通过AGO2游离的过氧化物如此一来缓冲。寻常的是，CDR1as水准很或许是通过依此格被miR-7缓冲的，并且依赖于miR-671。从未有的一份数据分析显然RNA修饰（m6A）倡导了潜在可过氧化物circRNAs的大分长子内切酵素的招募。另一项数据分析断依此HeLab线粒体未及poly（I：C）处理或EMCV感染即时有发生整体circRNAs的过氧化物。两种处理都加剧了内切反应器糖大分长子酵素Rnase L的激已逝以及circRNAs的过氧化物。除了过氧化物，circRNAs或许被线粒体外表皮。几项数据分析测依此了外泌体之中的circRNAs。然而，唯不清楚到底circRNAs的表皮对降更是高其十面体内水准有成就。或者，circRNAs表皮或许逐步形成了一个交流必要。总的来说，难以实现逐渐降更是高的证据显示circRNAs是机能分长子结构设计者，它的过氧化物、十面体外铁路运输都则会是下一代数据分析的不可忽视原因。2. circRNAs的特征和性质2.1 circRNAs的生物亦然circRNAs存有于绝大多数海洋生物之中。它们是如何生物的？circRNAs亦然有多个层面。第一个是直系同源orthologous或旁系同源paralogous反应器糖体都可加剧circRNAs。某些circRNAs加剧于完全相同群落之中或多或少的或相同的反应器苷酸。这种前提，亦然或许扩展到circRNAs第8军团的部分依此格反应器糖体。一份通过mapping中时有体依此格反应器糖体的数据分析解剖了从人类和血清之中枢神经该系统来源不明的circRNAs，结果确实，左右1/3测依此的circRNAs共享两个依此格反应器糖体，1/3共享一个依此格反应器糖体，确实了在哺乳食肉动物之中枢神经该系统之中比较高度的亦然。再次一个水准是circRNAs内机能模组的亦然。这或许包括了RBPs融故称反应器糖体，miRNA，或circRNAs内机能性二级结构设计者所须要模组。比如，Rybak断依此了较短偏移段落碱基（某些或许是RBP融故称反应器糖体）在circRNAs反应器苷酸之中可溶性，认为了中时有体反应器苷酸之中更是高层次的亦然。2.2民间组织或发育阶段以及亚线粒体相对于抗原暗示加剧circRNAs的遗传物质含硫之中枢神经该系统都有遗传物质。因此，神经民间组织之中含硫circRNAs也就不奇怪了。circRNAs丰沛于CNS之中是所有数据分析群落之中的普遍特征。CNS之中circRNAs的值得注意丰沛或许由来1个或多个状况。首先，之中枢神经该系统，更是都有的，在整个躯体之中神经该系统显出出最高层次的非对称依此格。而circRNAs的海洋生物小分长子可以被依此义为一种类似类别的非对称依此格。第二，circRNAs半衰期较短，并且神经该系统一般而言则会决裂，circRNAs假依此可以在之中枢神经该系统发育和衰老每一次之中大大所受益甚至更是高可靠性加剧。circRNAs在血清苍蝇之中随着衰老在之中枢神经该系统之中大量产出，显然了circRNAs或许参与衰老都有的之中枢神经该系统哮喘。在线粒体遗传物质部将与circRNAs需求量之时有存有排斥的负都有。因此，所受益或许是之中枢神经该系统之中高层次circRNAs主要的原因。circRNAs另外一个寻常结构上是其亚线粒体相对于。circRNAs主要相对于于线粒体质之中。而且，媒体报道显示神经该系统之中circRNAs相对于在轴突，小脑和LTP体。寻常的是，一些circRNAs显出出发育阶段特异的反应器-质转成相对于。从未有的数据分析解剖了跳蚤Hel25E和人类UAP49/56作为circRNAs线粒体反应器输出的决不作为q，并且以依赖circRNAs较短度的作法主导作用。在绝大多数前提，circRNAs总共的唯一的特征就是放射状结构上，反应器苷酸通往复故称体的存有，以及不存有帽长子结构设计者和polyA尾巴。因此，识别和外输的必要才会不仅高度特异于类似circRNAs也才会识别一个或多个这些特征。circRNAs相对于到轴突，小脑以及LTP也是很奇怪的是的。唯不清楚这种相对于是由于依此向铁路运输还是弥散后畅通无阻。进一步的遗传和有机体实验所需探究飞轮circRNAs在神经该系统之中亚线粒体相对于的必要。已确依此，唯没有数据分析利用已逝线粒体图像调查circRNAs副产物和铁路运输，而此类作法必依此则会是检查和这些假说的决不作为。而且，这个应用仍然缺乏对完全相同十面体内区室之中circRNAs分长子结构设计者数目和类别的精确描述。2.3 circRNA作为miRNA机能的缓冲长子一些较短非解码RNA可以通过功能性吸附（sponging）缓冲miRNA水准和/或已逝性。数据分析确实某些circRNAs含有许多miRNA融故称反应器糖体，推测这些circRNAs也可以作为miRNA海绵。比如，CDR1as兼具73个seed-binding 反应器糖体对miR-7，并且，AGO2 CLIP数据确实其实有许多miR-7融故称到了这些反应器糖体上。CDR1as敲除血清之中miR-7水准极端但值得注意地增高，而miR-671降更是高，显然了这个circRNAs的存有保持稳依此了miR-7，而使miR-671不保持稳依此。因此，CDR1as或许在某些信号下缓冲了miR-7的存储和扣留。CDR1as也只能铁路运输和扣留miR-7到类似十面体内隔室，缓冲miR-7机能。这个机能或许在下一代被利用来铁路运输基于miRNA的治疗。虽然对circRNAs碱基完全的测依此以及AGO2 PAR-CLIP数据的解剖揭示了绝大多数circRNAs不能国际上融故称到miRNA，仍然有其他例长子如circSry，circHIPK，circFOXO3，circITCH，circBIRC6，它们都能与miRNA融故称发挥机能性主导作用。利用AGO-RIP和CLIP电子技术对测依此到底存有circRNAs与miRNA时有如此一来化学键相当决不作为。构建敲除和敲更是高线粒体系数据分析circRNAs与推断的miRNA机能和水准时有化学键也很不可忽视。2.4 circRNAs的中文翻译2017年，几个课题组媒体报道了circRNAs可被中文翻译。寻常的是，可中文翻译circRNAs趋向于可用与寄生虫遗传物质或多或少的起始密码长子，而终止密码长子则是生物偏向的且特异于放射状ORF。该数据分析还断依此circRNAs是被膜萘的反应器糖体中文翻译。另外的数据分析断依此起始密码长子河口的RRACH基序(R=G or A； H=A， C or U) 之中的A被组氨基酸时，可以提高circRNAs的中文翻译。由于circRNAs不含5’帽长子，它的中文翻译是帽长子脱离的。其实，某些中文翻译circRNAs兼具内部反应器糖体进入反应器糖体（IRES），只能在体内和体外以帽长子脱离的作法中文翻译。寻常的是，绝大多数circRNAs预见的是与其寄生虫遗传物质解码氨基酸质的N尾端地带完全相同。这种缩较短了的氨基酸质或许则会竞争性可抑制其mRNA全较短对应物。酪氨酸qMef2或许就是一个例长子。难以实现这个应用的迅速持续发展，我们届时在年中几年就能看到circRNAs中文翻译以及加剧的病理波动的数据分析出现。3. circRNAs 作为陷阱、铁路运输器或预制由于circRNAs只能较短时时有存有以及融故称RBPs，它们只能作为这些q的陷阱或者仓储长子。在某些前提，circRNAs和寄生虫遗传物质氨基酸可如此一来或时有接地完成交互主导作用。circMbl像是就是如此，它或许就隔绝/仓储了MBL氨基酸。这是假依此的circMbl负反馈缓冲环路的一个组分。2016年，一项数据分析首次确实circANRILl可以作为一个氨基酸预制。在NIH3T3血清成纤维线粒体，circFOXO3被断依此能分别与p21和CDK2化学键。circFOXO3-p21-CDK2三元复故称体的逐步形成阻碍了CDK2的机能，随后可抑制了线粒体周期进程。3.1检查和circRNAs的体内机能数据分析断依此，敲除CDR1as加剧了神经麻痹都有的进化论表型。cia-cGAS (Cyclic GMP-AMP synthase) 通常高暗示于较短期培养HSC线粒体反应器之中，只能融故称cGAS，阻碍了它的激已逝。Cas9敲除cia-cGAS河口的第8军团外显长子之中偏移二者之间碱基可抑制其暗示后，cia-cGAS局限性血清之中较短程HSC线粒体群体缩减，并且升高了骨髓之中type I抗病毒的产量，最终加剧干线粒体过剩。当前数据分析确实，可用遗传解码的shRNA针对偏移依此格通往敲更是高circMbl。当上半身敲更是高circMbl时，加剧遗传物质暗示变动，雄性发育染病，行为局限性，翅膀姿势及跳伞的局限性。当敲更是高CNS之中的circMbl时，加剧了不正常的LTP机能。3.2 circRNAs的其他潜在机能circRNAs或许还有什么样的分长子结构设计者机能呢？circRNA兼具一个令人痴迷的特征即极其保持稳依此并且随时时有所受益。因此，circRNAs可以作为线粒体酪氨酸近现代的分长子结构设计者记忆分长子结构设计者或者“跳伞记录器”。从病理学观点来看，较短时时有存有的circRNA或许作为兼具氨基酸解码潜能的存储库。未及发育变动或诱使，这些存储器或许被中文翻译为缓冲诱使声势浩大或病理变动的氨基酸质。LTP之中circRNA的本底中文翻译或许是比较不可忽视的。因为circRNAs融故称与RBPs，如miRNAs一样，circRNAs或许通过融故称，呈交和扣留它们的装卸到类似十面体内区室而发挥主导作用。更是进一步地难以实现circRNAs存有于囊泡，它们可以被铁路运输到整个躯体，然后被类似民间组织接收，作为信号分长子结构设计者发挥主导作用。另外，一个circRNA可以承载1个或几个装卸分长子结构设计者（miRNA，RBPs），因此可以作为药物铁路运输扣留的表现形式。4.结论与下一代本文概述里过往的数据分析，确实circRNAs兼具多种机能，可以作为氨基酸预制，招募其他类别RNA，并且通过融故称miRNAs影响酪氨酸呐喊、中文翻译和特异mRNA的过氧化物；神经该系统之中circRNAs的不对称地理分布显然了如此一来线粒体时有铁路运输的或许性；circRNAs只能解码从到氨基酸，虽然迄今为止并不知道绝大多数或许的氨基酸的病理机能，很有或许他们则会与其寄生虫遗传物质差分RNA解码全较短氨基酸共享某些能力。由于RNA电子技术的稳步持续发展，我们届时年中circRNAs应用必依此则会有较短足的持续发展。进一步的对circRNAs相对于，仓储，已逝线粒体内过氧化物，完整的circRNAs化学键组，以及单线粒体研究成果的思考都将在这个应用取得进步。原始出处：Patop IL1, Wüst S1, Kadener S1.Past, present, and future of circRNAs.EMBO J. 2019 Aug 15;38(16):e100836. doi: 10.15252/embj.2018100836. Epub 2019 Jul 25.